Detection of Legionella pneumophila in water and biofilm samples by culture and molecular methods from man-made systems in São Paulo - Brazil

Legionella pneumophila is a pathogenic bacteria associated to aquatic habitat of natural and artificial environments. Clinical cases of legionellosis have been reported in Brazil but there is a lack of information about the incidence and concentration of this bacterium in environmental sources. Thus, the present study was designed to evaluate the occurrence of legionellae in São Paulo city, Brazil, using different methods of detection and identification. Sixty-seven water and biofilm samples from natural reservoirs and man-made systems were collected and analyzed for the presence of Legionella spp by culturing onto a selective medium, coculture in axenic free-living amoebae and direct fluorescent antibody (DFA) assay. Results showed that freshwater of reservoirs did not contain legionellae, Legionella pneumophila was isolated from man-made systems, with predominance of Legionella pneumophila serogroup 1 strains. Although there was no statistical difference among the proposed detection methods, the plate culture method yielded a higher number of L. pneumophila positive samples, followed by amoebic coculture procedure and direct fluorescent antibody assay. Results of PCR and sequencing reactions revealed that application of macrophage infectivity potentiator gene as a molecular marker was an important tool for the identification of environmental isolates of L. pneumophila. The agreement among the three detection methods-when all methods yielded similar results- and the prevalence of a single Legionella species in the sampled man-made systems could suggest that the occurrence of this bacterium had been influenced by the higher concentration of metallic ions dissociated in water of those systems than in natural reservoirs. Thus, the results of this study revealed that the water of man-made systems in Sao Paulo may serve as a reservoir for L. pneumophila and other microorganism, including free-living protozoans.

Legionella pneumophila é uma bactéria patogênica associada à habitats aquáticos de ambientes naturais e artificiais. Casos clínicos de legionelose têm sido descritos no Brasil, mas a incidência e concentração desta bactéria em fontes ambientais ainda são pouco conhecidas. Assim, o presente estudo foi desenvolvido para avaliar a ocorrência de bactérias do gênero Legionella na cidade de São Paulo, Brasil, utilizando diferentes métodos de isolamento e identificação. Sessenta e sete amostras de água e biofilme de reservatórios naturais e sistemas artificiais de climatização de ambientes interiores foram coletadas e analisadas quanto à presença de Legionella spp por métodos de cultivo em meio-de-cultura seletivo, cocultivo com amebas de vida livre axênicas e ensaios de imunofluorescência direta (IFD). Os resultados demonstraram que bactérias do gênero Legionella não foram detectadas em reservatórios naturais de água, Legionella pneumophila foi isolada de sistemas artificiais de climatização, com predominância de cepas de Legionella pneumophila sorogrupo 1. Apesar de não ter havido diferença estatística significante entre os métodos de detecção propostos, o método de cultivo em placa produziu o melhor resultado quanto ao número de amostras positivas para L. pneumophila, seguido do procedimento de cocultivo com amebas e ensaio de imunofluorescência direta. Os resultados das reações de PCR e sequenciamento revelaram que a aplicação do gene potencializador de infecção em macrófagos como marcador molecular foi um importante implemento na identificação de isolados ambientais de L. pneumophila. A concordância existente entre os três métodos de detecção - quando todos os métodos produziram resultados similares - e a prevalência de uma espécie de Legionella nos sistemas artificiais amostrados poderia sugerir que a ocorrência desta bactéria tenha sido influenciada pela maior concentração de íons metálicos dissociados na água daqueles sistemas do que...

Contribuiçäo ao estudo da suscetibilidade de Acanthamoeba spp a diferentes métodos de desinfecçäo de lentes de contacto gelatinosas

Desde 1980 vários casos de ceratite por Acanthamoeba têm sido diagnóstico e, ao contrário dos primeiros relatos onde o fator desencadeante era o trauma, atualmente a quase totalidade dos casos relaciona-se com o uso de lentes de contacto. Estudos têm sido desenvolvidos para esclarecer o envolvimento destas lentes na fisiopatologia da ceratite por Acanthamoeba. Dentre estes, a avaliaçäo dos diferentes sistemas de desinfecçäo empregados na sua manutençäo, aponta como um assunto contoverso e de interesse cientifico, uma vez que, um grande número de espécies e cepas estäo envolvidas, apresentando, cada uma delas, um comportamento diferente, em relaçäo a estes sistemas. Este estudo teve por objetivo testar a susceptibilidade de cinco diferentes espécies de Acanthomoeba, A. Astronyxis, A. Polyphaga, A. castellani, A. Cellbertsoni e Acanthamoeba sp a um sistema de desinfecçäo térmica química (Hidrocare e Flex-care). Dois experimentos foram realizados. No primeiro, lentes de contato gelatinosas foram contaminadas com as diferentes espécies do protozoário e em seguida submetidas a desinfecçäo e cultivo. No segundo, cistos e trofozoítos das mesmas espécies foram expostos diretamente aos sistemas de desinfecçäo, sendo posteriormente lavados, com o objetivo de eliminar a soluçäo química eventualmente presentes na superfície da ameba. O controle foi defínido pelo aparecimento de forma trofozoíticas. A desinfecçäo térmica mostrou-se efetiva em 100% dos testes realizados com as cinco diferentes espécies de Acanthamoeba avaliadas. A culbertsoni resistiu a desinfecçäo química com Flexcare, sendo susceptível ao Hidrocare, e Acanthomoeba sp resistiu aos dois compostos testados. O estudo permitiu concluir que, dos métodos testados, a desinfecçäo térmica é a única totalmente efetiva para a desinfecçäo de lentes de contacto gelatinosas contaminadas com Acanthamoeba

Acanthamoeba culbertsoni: sensibilidade aos diferentes métodos de desinfecçäo de lentes de contato hidrofílicas / Acanthamoeba culbertsoni: susceptibility to soft contact lens disinfection systems

Desde 1973, úlceras de córnea por Acanthamoeba spp têm sido descritas em número crescente e muitas vezes relacionados com o uso de lentes de contacto hidrofílicas (L.C.H.). Neste estudo foi testada a sensibilidade da Acanthamoeba culbertsoni aos diferentes métodos de desinfecçäo química (Hidrocare - Trietanol alquilamonio miramide e Flexcare - Clorixidine) e térmica (fervura simples por dez minutos com flutuador e aparelhos de asseptizaçäo - Contact Lens e Hydroset). Foram utilizadas 36 L.C.H. novas Soflens (Baush & Lomb) e 36 L.C.H. usadas Hydrosol (Solótica) que foram contaminadas com cistos e trofozoítos de Acanthamoeba culbertsoni por 12 horas. Após este período as lentes foram cortadas ao meio, ficando uma das metades semeada para controle e a outra submetida aos diferentes métodos de desinfecçäo, salientando-se que as lentes foram lavadas previamente com xampú apropriado por 20 segundos e enxaguadas com 5 ml de soluçäo fisiológica näo preservadas. As placas semeadas com as lentes eram observadas diariamente sob microspia óptica para detectar a passagem da forma cística para a trofozoítica, o que traduziria a viabilidade do parasita. Todos os resultados foram negativos. Todos os métodos testados se mostraram, eficientes. Concluímos que os métodos de desinfecçäo testados, desde que corretamente utilizados, säo eficazes na eliminaçäo da Acanthamoeba culbertsoni

Ulcera de córnea por Acanthamoeba: quatro primeiros casos de Brasil

Säo descritos os quatro primeiros casos de úlcera de córnea por Acanthamoeba no Brasil. Três pacientes eram usuários de lentes de contato gelatinosa e um de lente siliconada. Apesar da terapêutica com isotianato de propamidina 0,1%, miconazole 1%, neomicinapólimixina B-gramicidna tópicos e Ketoconazole oral em um caso, retalho conjuntival em outro, todos necessitaram de transporte terapêutico. A comprovaçäo diagnóstica foi pelo exame anátomo-patológico em dois pacientes e por raspado corneano corado por Giemsa e cultura positiva para Acanthamoeba em meio sólido ágar- infusäo de soja enriquecido com E. coli nos outros dois. Acreditamos que esta patologia deva ser considerada no diagnóstico diferencial das úlceras de córneas entre nós, principalmente em usuários de lentes de contato